Plasminogen activator inhibitor 1 and Antipain preserve acrosome integrity of bovine spermatozoa during cryopreservation / Inibidor do ativador do plasminogênio 1 e antipaína preservam a integridade do acrossoma de espermatozoides bovinos durante a criopreservação

Seminal plasma contains serine proteases and serine protease inhibitor, which are involved in mammalian fertilization, and the inhibitors can be applied to prevent cold-induced sperm capacitation. The effects of different concentrations of two serine protease inhibitors were analyzed, Plasminogen activator inhibitor 1 - PAI-1 (70ƞg, 140ƞg and 210 ƞg) and Antipain (10µg, 50µg and 100µg) as supplementation to bovine semen cryopreservation extender. The effects of the inhibitors on the sperm parameters (sperm kinetics - CASA, acrosome integrity, plasma membrane integrity, mitochondrial membrane potential, sperm defects and acrosome reaction rate) were evaluated in the post-thaw semen. Cryopreservation of sperm with Antipain decreased post-thaw kinetic parameters of MP, VSL, LIN, SRT and the percentage of hyper-activated sperm while PAI-1 (210 ƞg) decreased VSL and LIN. Antipain and PAI-1 had no effect on the integrity parameters of the plasma membrane, mitochondrial membrane potential and sperm defects. Sperm cryopreserved in the presence of Antipain and PAI-1 (70 and 140 ƞg) preserved acrosome integrity, as they were able to complete the in vitro acrosome reaction. In conclusion, the serine protease inhibitors, Antipain and PAI-1 (70 and 140ƞg) are able to preserve the acrosome integrity of cryopreserved bovine sperm.(AU)

A criopreservação é parcialmente prejudicial à fertilidade do sêmen de bovinos e induz mudanças semelhantes à capacitação em espermatozoides. O plasma seminal contém serina-proteases e inibidores de serina-proteases que estão envolvidos na fertilização de mamíferos, e os inibidores podem ser aplicados para evitar uma capacitação espermática induzida pelo frio. Analisaram-se os efeitos de diferentes concentrações de dois inibidores de serina-proteases, inibidor do ativador do plasminogênio 1 - PAI-1 (70ƞg, 140ƞg e 210ƞg) e antipaína (10µg, 50µg e 100µg) na suplementação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. Trinta e seis ejaculados de quatro bovinos Curraleiro Pé-Duro foram usados para criopreservação. Os efeitos dos inibidores sobre os parâmetros dos espermatozoides (cinética espermática - CASA, integridade acrossomal, integridade da membrana plasmática, potencial de membrana mitocondrial, defeitos espermáticos e taxa de reação acrossomal) foram avaliados no sêmen pós-descongelamento. A criopreservação de espermatozoides com antipaína diminuiu os parâmetros cinéticos pós-descongelamento de MP, VSL, LIN, SRT e a porcentagem de espermatozoides hiperativados, PAI-1 (210ƞg) diminuiu VSL e LIN. Antipaína e PAI-1 não tiveram efeitos nos parâmetros de integridade da membrana plasmática, no potencial de membrana mitocondrial e nos defeitos espermáticos. Espermatozoides criopreservados na presença de antipaína e PAI-1 (70 e 140ƞg) preservaram a integridade acrossomal, assim como foram capazes de completar a reação acrossômica in vitro. Em conclusão, os inibidores de serina-proteases, antipaína e PAI-1 (70 e 140ƞg) são capazes de preservar a integridade acrossomal de espermatozoides criopreservados de bovinos.(AU)

Avaliação in vitro do sêmen criopreservado de cães naturalmente infectados por Leishmania sp / In vitro evaluation of cryopreserved semen of dogs naturally infected by Leishmania sp

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade in vitro do sêmen criopreservado de cães naturalmente infectados por Leishmania sp. Foram coletadas amostras de sêmen de 12 cães, sendo seis positivos (GI) e seis negativos (GII) para leishmaniose visceral (LV), semanalmente, totalizando quatro coletas por animal. O sêmen criopreservado foi avaliado pelo teste de termorresistência rápida (TTR), nos tempos zero, 30 e 60 minutos, pela análise computadorizada (CASA) e por meio de sondas fluorescentes; esta última técnica com o intuito de avaliar a integridade das membranas espermáticas. Houve diferença estatística pela técnica de TTR no parâmetro motilidade progressiva, no tempo 0min (68,33% GI e 72,50% GII), e no vigor espermático (2,67 GI e 3,0 GII), no tempo 30min. Quanto ao CASA, houve diferença estatística apenas na motilidade total (27,50% GI e 57,08% GII), embora os demais parâmetros seminais tenham apresentado valores relativos diminuídos nos cães do GI. Nas análises com sondas fluorescentes, foram observadas diferenças estatísticas entre os grupos quanto à integridade das membranas plasmática e acrossomal e ao potencial mitocondrial das células espermáticas. Concluiu-se que a LV pode comprometer a qualidade do sêmen criopreservado de cães parasitados.(AU)

The aim of this study was to evaluate the in vitro quality of cryopreserved semen of dogs naturally infected by Leishmania sp. 12 dog semen samples were collected, with 06 positive (GI) and 06 negative (GII) for Visceral Leishmaniasis (LV), weekly, totaling 04 collections per animal. The cryopreserved semen was evaluated by the Rapid Termorresistência Test (TTR), at 0, 30 and 60 minutes by computer analysis (CASA) and by means of fluorescent probes, the latter technique in order to assess the integrity of the sperm membrane. There was no statistical difference for the TTR technique in the progressive motility parameter, at time 0min (68.33% GI and GII 72.50%), and sperm vigor (2.67 GI and GII 3.0), time 30min. As for the CASA, there was statistical difference only in total motility (27.50% GI and GII 57.08%), although other semen parameters have submitted lower figures for GI dogs. In the analyzes with fluorescent probes statistical differences were noted between the groups in terms of plasma membrane integrity and acrosomal and mitochondrial potential of sperm cells. It was concluded that LV can compromise the quality of cryopreserved semen of infected dogs.(AU)

Características do sêmen de carneiros Dorper, Santa Inês e sem padrão racial definido, pré e pós-congelação, nos períodos chuvoso e seco / Characteristics of the semen of Dorper, Santa Ines and undefined breed sheep, pre-and post-freezing, in the rainy and dry period

Avaliaram-se as características espermáticas de carneiros Dorper, Santa Inês e sem padrão racial definido, nos períodos chuvoso e seco. Após ser colhido por vagina artificial, o sêmen foi avaliado quanto ao volume, ao turbilhonamento, à motilidade, ao vigor, à morfologia e à concentração, congelado e armazenado em botijão criogênico. Depois de descongelado, foram avaliadas a cinemática espermática, a integridade da membrana plasmática, a integridade do acrossoma e a atividade mitocondrial. Vigor espermático, motilidade total, motilidade progressiva, velocidade em linha reta e defeitos maiores não diferiram entre os períodos chuvoso e seco, porém volume, turbilhonamento, linearidade, retilinearidade e frequência de batimentos de cauda foram mais baixos (P<0,05) no período seco; já concentração espermática e defeitos totais apresentaram valores mais baixos no período chuvoso. Valores de integridade do acrossoma e da membrana plasmática, bem como o potencial de membrana mitocondrial, foram mais baixos (P<0,05) no período seco. Conclui-se que os períodos chuvoso e seco influenciam na qualidade espermática de ovinos criados na região Meio-Norte do Brasil e que esses animais têm uma qualidade espermática superior no período chuvoso, quando, portanto, deve ocorrer a criopreservação. Também se observou que, em relação à qualidade espermática, o melhor grupo de carneiros foi o Santa Inês...

The sperm characteristics of Dorper, Santa Ines and undefined breed ram in the rainy and dry seasons was assessed. After collection with an artificial vagina, the semen was evaluated for volume, turbulence, motility, viability, morphology and concentration, frozen and stored in a cryogenic cylinder. After thawing kinematic sperm, plasma membrane integrity, acrosome integrity and mitochondrial activity were evaluated. Sperm vigor, total motility, progressive motility, straight line speed and larger line defects did not differ between the rainy and dry seasons, however, volume, turbulence, linearity, straightness and frequency of tail beats were lower (P<0.05 ) in the dry period, and sperm concentration and total defects showed lower values during the rainy season. Values for acrosome integrity and plasma membrane and mitochondrial membrane potential were lower (P<0.05) in the dry season. It is concluded that the wet and dry period influence sperm quality in ram raised in the Mid - North region of Brazil, with a higher sperm quality in the rainy season, thus suggesting cryopreservation for that period. Also, the better ram group regarding sperm quality, was the Santa Ines...

Qualidade do corpo lúteo e do embrião de ovelhas Santa Inês superovuladas com FSH associado à rbST / Quality of corpus luteum and embryo of Santa Inês ewes superovulated with FSH associated with rbST

Avaliou-se o efeito da somatotropina bovina recombinante (rbST) sobre a qualidade do corpo lúteo e do embrião e sobre a concentração de progesterona (P4), em ovelhas da raça Santa Inês doadoras de embriões. Foram utilizadas 13 doadoras, distribuídas aleatoriamente em dois grupos, G1 (n=7) e G2 (n=6). Em ambos os grupos, as doadoras foram sincronizadas com implante vaginal por 14 dias, receberam 100µg de PGF2α (Ciosin®) no sétimo dia e foram superovuladas, a partir do 12º dia, com 250UI de FSH (Folltopin-V®) em seis doses decrescentes. No dia da retirada do implante, as doadoras do G2 receberam 125mg de rbST (Boostin®) e foram cobertas por macho Santa Inês a cada 12 horas até o final do estro. No sexto dia após a primeira cobrição, foram avaliadas, por laparoscopia, a resposta superovulatória e a quantidade e a qualidade dos corpos lúteos. Após as avaliações, as colheitas embrionárias foram realizadas por laparotomia. A administração da rbST no protocolo de superovulação promoveu aumento significativo (P<0,05) no número de corpos lúteos do tipo I (9,00 x 5,28) e na qualidade embrionária (4,33 x 2,00).

We evaluate the effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) on the quality of the corpus luteum and embryo and on the concentration of progesterone (P4) in donors embryo sheep Santa Ines. 13 donors were used, randomly assigned to two groups, G1 (n=7) and G2 (n=6). In both groups, the donors were synchronized with vaginal implant for 14 days and received 100µg of PGF2α (Ciosin®) on the seventh day and were superovulated, from the 12th day, with 250IU of FSH (Folltopin-V®) in six decreasing doses. On the day of implant removal the donor G2 received 125mg of rbST (Boostin®), and were covered by Santa Inês male every 12 hours until the end of estrus. In the sixth day after the first mating were evaluated by laparoscopy, superovulatory response and the amount and quality of the corpus luteum. After the evaluations, the embryonic harvests were performed by laparotomy. The administration of rbST in superovulation protocol promoted a significant increase (P <0.05) in the number of corpus luteum of type I(9.00 x 5.28) and embryo quality (4.33 x 2.00).